Optimización de las Condiciones de Extracción de Compuestos Fenólicos en el Extracto de Orujo de Uva Variedad
Malvasía
Publicación Cuatrimestral. Vol. 3, No 3, Septiembre/Diciembre, 2018, Ecuador (19-36)
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La fase final del proceso de optimización es la validación de los resultados obtenidos, que
consiste en la ejecución de los ensayos experimentales a las condiciones óptimas predichas,
por la relación matemática obtenida a partir los datos experimentales y las superficies de
respuesta. Una vez obtenidos los extractos a las condiciones óptimas, se calculó el error
entre el valor predicho por el modelo y el valor obtenido experimentalmente para el contenido
de compuestos fenólicos, utilizando la Ecuación 2.
2.6.
Determinación de la actividad antioxidante de los extractos obtenidos bajo
condiciones óptimas de extracción
La actividad antioxidante total del extracto optimizado se evaluó por el método ABTS
reportado por Riece-Evans et al., (1994), como patrón de referencia se empleó TROLOX. La
generación química del radical ABTS
•+
se realizó a partir de la reacción de una solución de
ABTS 7 mM con persulfato potásico 2,5 mM, ambos reactivos en una proporción de 1:1. Esta
mezcla se dejó en reposo a temperatura ambiente (± 25 ºC) durante un tiempo mínimo de 16
horas antes de comenzar las evaluaciones. Una vez formado el radical ABTS
•+
, se diluye
hasta alcanzar una absorbancia de 0,6- 0,7 a 750 nm (longitud de onda de máxima
absorción), lo cual se logra mezclando aproximadamente 160 µL de la solución de ABTS
•+
y
3000 µL de etanol puro (Vit et al., 2008; Kuskoski et al., 2005). El radical generado fue estable
por un periodo máximo de 24 horas, luego de este tiempo la absorbancia decae
progresivamente y el radical no puede ser empleado para el análisis. La evaluación de la
actividad antioxidante total en las muestras se realiza de acuerdo a la metodología descrita
por Vit et al.
(2008). Al radical ABTS•+ generado se le determinó la absorbancia a 750nm
(Abs cromóforo radical, t
0min
), se añaden 40 µL de la muestra de extracto y se mide
nuevamente la absorbancia a 750 nm transcurridos 5 minutos (Abs. Cromóforo radical +
antioxidante, t
5min
).
La actividad antioxidante total (TAC) de la muestra se determinó de acuerdo a la Ecuación
3:
TAC= (Abs. Cromóforo radical) t
0min
– (Abs. Cromóforo radical + antioxidante) t
5min
. (3)
|Error (%) =
Valor predicho − Valor experimental
Valor predicho
| x 100
(2)