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MSc. Laura Soto y col.

 

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en  bolsas  herméticas  a  temperatura  ambiente  y  en  un  lugar  seco  hasta  su  posterior  uso 

(Arveláez et al., 2003). 

2.2. 

 Análisis proximal del orujo fresco 

Se evaluaron las variables: humedad (método AOAC, 7.007), grasa cruda (método AOAC, 

7.055),  fibra  cruda  (método  AOAC,  7.061),  cenizas  (método  AOAC,  7.009)  y  proteínas 

(método Kjeldahl AOAC,  7.015); en el orujo  fresco.  Cada variable  evaluada se realizó  por 

quintuplicado 

2.3. 

Obtención de los extractos 

La  extracción  de  los  compuestos  fenólicos  derivados  de  la  uva  se  realizó  por  medio  de 

ultrasonido empleando como solvente etanol a diferentes concentraciones (100, 70 y 50%) a 

un tiempo de 40 min. La temperatura osciló entre 30, 40, 50 y 60°C. Se pesaron 0,5 g de 

muestra, se le agregaron 5 mL de solvente y se agitó (Vortex) por 2 minutos a una velocidad 

intermedia.  Los  experimentos  se  realizaron  por  quintuplicado  en  un  equipo  de  ultrasonido 

(Elma, Potencia 35KHz). Posteriormente, las muestras se centrifugaron a 10000 rpm (11200 

fuerza g) por 5 min y se evaporaron a 50 °C hasta sequedad. Una vez evaporado totalmente 

el solvente, se taparon. El extracto puro obtenido se mantuvo a - 4°C, en envases ámbar por 

un máximo de 48 h (Guntero et al., 2014).  

2.4. 

Determinación del contenido de fenoles totales 

Para  la  determinación  del  contenido  de  fenoles  totales  se  utilizó  el  método  indicado  por 

Amerine  &  Ought  (1976)  con  algunas  modificaciones.  Se  pesaron  de  10  a  15  mg  de  los 

extractos  secos  y  se  disolvieron  cada  uno  en  1  mL  de  etanol,  sin  realizar  diluciones.  La 

determinación se realizó empleando como solución patrón 1000 mg.L

-1

 de ácido gálico (99%, 

Riedel de Häen) a partir de la cual se realizó la curva de calibrado en el intervalo de 100-1000 

mg ácido gálico.L

-1

. La preparación de las soluciones patrón se realizó agregando 1580 μL 

de agua en tubos de ensayo, 20 μL de solución patrón o muestra y posteriormente se adicionó 

100  μL  de  reactivo  Folin.  Se  mezclaron  uniformemente  y  se  esperó  1  minuto  antes  de 

adicionar a cada uno 300 μL de una solución al 20 % de carbonato de sodio Na

2

CO

3

 (J.T 

Baker);  luego  de  esto,  se  dejaron  reposar  en  la  oscuridad,  a  24  ºC  por  dos  horas  para 

finalmente  medir  la  absorbancia  a 750  nm  en  un  espectrómetro  UV-visible  con  arreglo  de 

diodo (Thermo Scientific, Genesys 10S Uv-visible). Los resultados se expresaron en mg.L

-1

 

de equivalentes de ácido gálico (GAE, por sus siglas en inglés: Galic Acid Equivalents).  

2.5. 

Diseño del experimento