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Materiales y métodos
A. Ubicación geográfica donde se efectuó de
la investigación
El trabajo experimental se realizó en el
Laboratorio de Microbiología Ambiental del área
Agroindustrial, Escuela Superior Politécnica
Agropecuaria de Manabí Manuel Félix López
(ESPAM MFL), ubicada en la cabecera cantonal
del cantón Bolívar, de la provincia de Manabí,
Ecuador. Situada geográficamente entre las
coordenadas 00° 50’ 39” Latitud Sur, 80° 09’
33” Longitud Oeste y una Altitud de 15,5940
msnm. Las características climáticas de la
zona son: Temperatura media anual de 25,6
°C, Precipitación medio anual de 838,7 mm,
Humedad relativa media de 78%, T. heliofanía
de 1.158 horas sola °C al año y Evaporación de
1.365,2 cm (Vera, A., 2006).
El experimento se realizó en dos fases. Una
primera referente al medio de cultivo para
determinar la capacidad de crecimiento micelial
que tiene el hongo P. sapidus a nivel in vitro, y
una segunda caracterizada por la concentración
de inóculo sobre el residuo de maíz (Z. mays) en
la producción de materia orgánica de alta calidad.
B. Primera Fase:
1. Preparación de medios sintéticos
Se emplearon medios de cultivo para el
crecimiento micelial de la cepa P. sapidus tales
como: agar papa dextrosa (PDA), agar sabouraud
(SBA) y agar czapek (CZPA). El medio de PDA
se elaboró con 200 g/L de papa filtrada, 17 g/L de
dextrosa y gelificado con 20 g/L de agar-agar, las
dosis usadas de los medios de cultivo SBA y CZPA
fueron de 65 g/L y 48 g/L de su composición. El
pH de los tres medios fueron ajustados a 5,8±0,2
con las soluciones de ácido clorhídrico (HCl) e
hidróxido de sodio (NaOH) a 1N, la esterilización
de los medios fue en autoclave vertical a 121 °C
por 15 minutos. Los medios fueron distribuidos
en placas petri de 90 mm de diámetro con 20 mL.
A los medios se les efectúo un control de calidad
a 25±2 °C por 72 horas.
2. Preparación del inóculo
Se usó tres tipos de agares en estado sólido
para conocer el crecimiento micelial de la cepa
P. sapidus registrada con el código (PSQ),
perteneciente a la colección de cultivo del
Laboratorio de Microbiología de la Universidad
Técnica Estatal de Quevedo (UTEQ), del cantón
Quevedo de la provincia de Los Ríos. La cepa fue
transportada bajo condiciones de frío para evitar
que se acelere su proceso enzimático normal, se
rotuló con cinta adhesiva y se incluyó en el detalle
de la siembra. En la cabina de flujo laminar se
purificó el hongo P. sapidus en agar sabouraud
en cuña, se incubó por 72 horas a 25±2 °C, y
posteriormente se repurifico en el mismo medio
en placa con las mismas condiciones para
obtener micelium adecuado e iniciar el proceso
de crecimiento a nivel in vitro.
3. Procedimiento experimental
En los respectivos medios cultivo, se inóculo
micelio de 10 mm de diámetro de la cepa en
estudio y se incubaron a 25±2 °C durante 8
días en los que el micelio cubrió las placas petri.
Cada tratamiento se realizó con cinco replicas
dando un total de 15 unidades experimentales.
Las variables evaluadas en esta fase fueron:
diámetro promedio del crecimiento micelial
(mm) y morfología micelio. Se utilizó paquete
estadístico InfoStat versión 2008 (Di Rienzo, et
al., 2008). Los datos obtenidos se analizaron con
diseño factorial para comprobar la significación
de los factores analizados a través de la prueba
de Tukey (P≤0,05).
C. Segunda Fase:
1. Preparación de semillas de maíz para la
producción de inóculo
Previamente, la semilla se limpió, lavó e hidrató
por inmersión en agua durante 24 horas.
Revista
Edición especial 2017, 18 - 24
ISSN: 1390-6895 e-ISSN: 2477-8982
Agricultura y Silvicultura
Manuel Ricardo Saltos Giler; Mendieta Morrillo Ronald Roberty;
María Eugenia Intriago Cool; Ayda De La Cruz Balon; Mario René López Vera