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Transcurrido el tiempo de hidratación, los
granos se enjuagaron y se escurrió el exceso
de agua con la ayuda de un cernidor, pasando
un lienzo seco sobre las semillas hasta que al
momento de tomar una porción con la mano
esta no quede húmeda. La cantidad de agua
que absorbe la semilla es de aproximadamente
30%. La semilla fue enriquecida con 2% de
azúcar. Una vez controlado el contenido de
humedad en el grano, se colocó 150 g en frascos
de vidrio de 250 mL de capacidad, después se
esterilizó autoclave, a 121 °C durante 60 min.
Los frascos esterilizados se enfriaron en un
área aislada y limpia.
2. Preparación de inóculo primario
El inóculo primario, como se mencionó
anteriormente, se elaboró a partir del micelio
desarrollado en medio de cultivo sabouraud. Este
se cortó con un sacabocado -desinfectado con
alcohol al 99% y flameado-, en fragmentos de
aproximadamente 15 mm y con una asa de siembra
se tomó el micelio y se colocó sobre la semilla.
Se usaron granos de maíz (Z. mays) con 30% de
humedad, previamente esterilizados durante 60
min a 121 °C. Los granos se inocularon con la cepa
en estudio y se incubaron a 25±2 °C durante 15
días en los que se formó el inóculo primario.
3. Preparación de Sustrato
Previo a la inoculación de P. sapidus al sustrato
de maíz, se realizó un tratamiento mecánico con
una picadora comercial, con el fin de disminuir
el tamaño de las partículas en fragmento de 3-5
cm. Los sustratos fueron humedecidos en un
90% (p/v) por 24 horas con agua destilada y,
posteriormente escurrido por un lapso de 2 horas,
llenado en fundas termoresistentes de 23 x 37 cm
y con capacidad de 1kg. L. La esterilización del
sustrato se efectuó en la autoclave vertical a 121
°C por 60 minutos y, finalmente se dejó enfriar
a temperatura ambiente. Para determinar la
eficiencia del autoclave se colocó cinta indicadora
de esterilidad y se preparó una bolsa de cada uno
de los tratamientos sin la adición de la semilla de
P. sapidus.
4. Inoculación en sustrato de maíz
La inoculación se realizó en cada una de las
bolsas con inóculo primario estéril. Este se cortó
con un bisturí - desinfectado con alcohol al 99% y
flameado- en fragmentos de aproximadamente 1
cm y con una asa de siembra. Se tomó el micelio
de las dosis diseñadas, suministrando una sola
vez durante todo el proceso 30, 40 y 50g de
inóculo secundario por cada bolsa de 1 kg.
5. Procedimiento experimental
Se realizó en un cuarto cerrado con un promedio
de temperatura de 24±2 °C por 15 días en fase
oscura. Una vez formados los primordios se
expusieron a luz artificial y lámpara fluorescentes
regulada automáticamente con 16/8 horas de
fotoperíodo y escotoperiodo, según metodología
de García (2007). El rango de humedad en
el sustrato fue entre 60-65% según la técnica
descrita por (Guzmán et al., 2008). Cada
tratamiento se lo realizó con cinco replicas dando
un total de 15 unidades experimentales, las cuales
además se sometieron a un análisis proximal al
final del cultivo. Se determinó el porcentaje de
lignina, nitrógeno, fosforo, potasio y carbono de
acuerdo a las metodologías establecidas por la
(AOAC, 1990). Se utilizó paquete estadístico
InfoStat versión 2008 (Di Rienzo, et al., 2008).
Los datos obtenidos se analizaron con diseño
factorial para comprobar la significación de los
factores analizados a través de la prueba de
Tukey (P≤0,05).
Resultados
A. Primera Fase:
1. Crecimiento radial del micelio de P. sapidus
En la tabla 1., se observa un mejor
comportamiento en el medio SBA sobre el
crecimiento radial desde las 48 hasta 264 horas
de evaluación con 7,46 y 88,86 mm, alcanzando
el 98,74% de colonización, obteniendo
condiciones adecuadas para el crecimiento
Revista
Edición especial 2017, 19 - 24
ISSN: 1390-6895 e-ISSN: 2477-8982
Agricultura y Silvicultura
Evaluación del crecimiento micelial y productivo de Pleurotus
sapidus a nivel in vitro y sobre residuo de maíz (Zea mays)