Microdisección por captura láser de Vibrio splendidus de Haliotis rufescens durante un episodio de mortalidad post-desove, un método alternativo para el estudio de enfermedades en acuicultura

Abstract

El examen histopatológico permite la observación directa de la estructura del tejido, la presencia de patógenos y su asociación con alteraciones celulares y tisulares; sin embargo, es casi imposible aislar e identificar estos microorganismos de preparaciones histológicas. El advenimiento de las tecnologías de microdisección por captura láser (LCM) en conjunto con herramientas moleculares se está utilizando actualmente para estudios genómicos, transcriptómicos y proteómicos en patología y parasitología humana y veterinaria. Una combinación de estas técnicas se puede utilizar para identificar un agente patógeno particular. Sin embargo, este innovador enfoque rara vez se ha utilizado para el estudio de patógenos en organismos acuáticos. Se llevó a cabo un análisis clínico, histológico, LCM, PCR, secuenciación Sanger y bacteriología convencional de abulones rojos, Haliotis rufescens, de un stock de reproductores que padecían un evento de mortalidad después del desove. En todos los casos el análisis clínico mostró hinchazón de los tejidos musculares, de la masa visceral y producción excesiva de moco. El análisis histopatológico mostró bacterias, con forma de bacilo curvado, que afectaban los tejidos musculares alrededor de la boca, la cabeza, el músculo del pie y el endotelio de los vasos hemolinfáticos. El análisis por LCM, PCR y secuenciación Sanger permitió identificar a las bacterias en los tejidos afectados como Vibrio splendidus. Por otra parte, el análisis bacteriológico y molecular convencional de una submuestra de la cabeza y músculo de uno de estos abulones permitió aislar e identificar a las siguientes especies: V. splendidus, V. chagasii, V. mediterranei, Vibrio sp. y Pseudoalteromonas sp. La tecnología LCM permitió la detección de las especies bacterianas proliferando en los tejidos y permitió su diferenciación de aquellas aisladas de los tejidos frescos completos. Esta combinación de técnicas modernas ayuda a definir qué bacterias deben seleccionarse para realizar los postulados de Koch y establecer su papel en el desarrollo de una enfermedad y/o evento de mortalidad. Los resultados obtenidos sugieren un estudio detallado sobre el papel de V. splendidus en eventos de mortalidades post desove en H. rufescens.